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作者:小編更新時(shí)間:2024-07-26
冰晶的形成
圖2 冷凍溫度與時(shí)間的曲線(xiàn)對照圖
細胞外冰晶和細胞內冰晶的形成從原理來(lái)解析,都是組織降溫速度不夠快,未能使組織快速達到玻璃態(tài)轉化點(diǎn)以下形成玻璃態(tài)凝固。如果冷凍速度足夠快,將大大減少形成冰晶,直接形成玻璃態(tài)凝固。。
秀威 冷凍包埋儀—超低溫快速包埋系統
設備制冷:室溫→ -50℃, 50-60分鐘
樣本制冷:根據不同標本需求,10-120秒
防止與減少冰晶的方法
取材
?樣本取材宜新鮮,盡量保持干燥
取材時(shí)組織樣本保持干燥,不要接觸水,必要時(shí)用PBS清洗。冷凍之前用濾紙或紗布吸去組織上多余的水分。樣本盡量不要用液體浸泡,浸泡后,組織內水分會(huì )增加,容易造成冰凍后冰品形成。
?樣本組織的大小和厚度
組織的厚度決定著(zhù)速凍的時(shí)間,如果太厚,會(huì )導致標本的表面還沒(méi)有冷凍,而貼近速凍臺的一面溫度已經(jīng)太冷。在不影響實(shí)驗結果的前提下,標本取材盡量小一些,控制在1.5cmx15cmx0.3cm,厚度不超過(guò)4mm,這樣有利于組織的快速凍結,并將組織塊盡快移到冷凍頭上驟冷,以縮短冷凍時(shí)間。
預冷
?提前開(kāi)機做好預冷
避免由于緩慢冷凍而產(chǎn)生冰品,宜提前開(kāi)冰切機做好預冷。將冰凍切片機的溫度降至-20℃~-25℃。一般將冷凍箱溫度降至-25℃℃,冷凍頭溫度降至-30℃。
?保持刀具與臺面的干燥
取材時(shí)盡量保持刀具與臺面的干燥,避免組織與水接觸,如送檢組織內含水或血性液體,應用干的紗布或濾紙把水分吸干后再行冷凍。
OCT包埋和速凍
?單獨OCT包埋劑包埋和速凍
樣品托放上速凍臺,加入少量OCT包埋劑,待底部變白但表面未凝固時(shí)放上組織樣本,適當加蓋少量包埋劑,加冷凍錘速凍組織(注意保持組織冷凍切面的水平)。這樣既可以提高冷凍速度,又可以避免接觸空氣后產(chǎn)生干、濕影響。
切片
?冰凍切片厚度適中
冰凍切片不能太薄,一般≧6um,6um的片子可以有更多的空間避免風(fēng)干假象,也會(huì )減少冰晶所造成的細胞核空洞。
總之,掌握“三度”是解決冰晶問(wèn)題的關(guān)鍵,即濕度、溫度、速度。
參考文獻:
毛成毅,杜娟,肖華亮,李增鵬.不同組織冰凍切片體會(huì ). 2017.
(來(lái)源:微信公眾號:病理海)