• <tt id="eeee8"></tt>
  • 行業(yè)動(dòng)態(tài)

    病理檢查中冰凍切片冰晶多的解決方法有哪些?

    作者:小編更新時(shí)間:2024-07-26

    在病理學(xué)中

    冰凍切片是一種常用的技術(shù)手段
    用于對組織樣本進(jìn)行快速凝固和切割
    以便進(jìn)行顯微鏡下的觀(guān)察和分析
    然而有時(shí)會(huì )發(fā)現冰凍切片中出現了過(guò)多的冰晶
    影響了切片的質(zhì)量和解讀結果
    今天我們就來(lái)講講
    病理中冰凍切片冰晶多的解決方法

    圖片

    冰晶的形成

    圖片

    生物體是由細胞構成的,水在各種組織細胞中含量最多。在冰凍切片中,組織中水分極易形成冰晶,因為水在結冰時(shí)因氫鍵的交聯(lián)而膨脹,聚合形成晶體態(tài)結晶,所以標本在冷凍過(guò)程中,水分很容易形成冰晶,使切片出現大量冰晶孔隙以及大小空泡,造成冷凍假象,從而影響到酶和抗原的定位。
    冰晶的大小與其生長(cháng)速率成正比,而與形成速率(成核率)成反比,也就是冰晶形成的數量愈多則愈小,對組織結構影響也愈嚴重。有文章認為冰凍開(kāi)始時(shí),冰晶形成速率較慢,以后逐漸增加,其臨界溫度為-3.3℃。從- 3.0℃降至- 4.3℃之間,形成速率急劇增加,然后再減慢。因此,在制片時(shí)首先必須做到組織在極短的時(shí)間內驟冷速凍,才能保證鏡下觀(guān)察時(shí)沒(méi)有冰晶干擾,組織結構才能清晰,細胞形態(tài)才能完好。

    1.webp

    圖2 冷凍溫度與時(shí)間的曲線(xiàn)對照圖


    細胞外冰晶和細胞內冰晶的形成從原理來(lái)解析,都是組織降溫速度不夠快,未能使組織快速達到玻璃態(tài)轉化點(diǎn)以下形成玻璃態(tài)凝固。如果冷凍速度足夠快,將大大減少形成冰晶,直接形成玻璃態(tài)凝固。。


    秀威 冷凍包埋儀超低溫快速包埋系統


    2.webp


    • -80℃快速冷凍,迅速達到制冷點(diǎn),有效減少冰晶產(chǎn)生。

      設備制冷:室溫→ -50℃, 50-60分鐘

      樣本制冷:根據不同標本需求,10-120秒

    • 斯特林制冷技術(shù),無(wú)需干冰、液氮、冷凍劑;
    • 面朝下包埋技術(shù),包埋面平整減少修片;
    • 豎切(立埋)更優(yōu)秀。



    防止與減少冰晶的方法



    取材

    ?樣本取材宜新鮮,盡量保持干燥

    取材時(shí)組織樣本保持干燥,不要接觸水,必要時(shí)用PBS清洗。冷凍之前用濾紙或紗布吸去組織上多余的水分。樣本盡量不要用液體浸泡,浸泡后,組織內水分會(huì )增加,容易造成冰凍后冰品形成。

    ?樣本組織的大小和厚度

    組織的厚度決定著(zhù)速凍的時(shí)間,如果太厚,會(huì )導致標本的表面還沒(méi)有冷凍,而貼近速凍臺的一面溫度已經(jīng)太冷。在不影響實(shí)驗結果的前提下,標本取材盡量小一些,控制在1.5cmx15cmx0.3cm,厚度不超過(guò)4mm,這樣有利于組織的快速凍結,并將組織塊盡快移到冷凍頭上驟冷,以縮短冷凍時(shí)間。

    預冷

    ?提前開(kāi)機做好預冷

    避免由于緩慢冷凍而產(chǎn)生冰品,宜提前開(kāi)冰切機做好預冷。將冰凍切片機的溫度降至-20℃~-25℃。一般將冷凍箱溫度降至-25℃℃,冷凍頭溫度降至-30℃。

    ?保持刀具與臺面的干燥

    取材時(shí)盡量保持刀具與臺面的干燥,避免組織與水接觸,如送檢組織內含水或血性液體,應用干的紗布或濾紙把水分吸干后再行冷凍。

    OCT包埋和速凍

    ?單獨OCT包埋劑包埋和速凍

    樣品托放上速凍臺,加入少量OCT包埋劑,待底部變白但表面未凝固時(shí)放上組織樣本,適當加蓋少量包埋劑,加冷凍錘速凍組織(注意保持組織冷凍切面的水平)。這樣既可以提高冷凍速度,又可以避免接觸空氣后產(chǎn)生干、濕影響。

    切片

    ?冰凍切片厚度適中

    冰凍切片不能太薄,一般≧6um,6um的片子可以有更多的空間避免風(fēng)干假象,也會(huì )減少冰晶所造成的細胞核空洞。


    總之,掌握“三度”是解決冰晶問(wèn)題的關(guān)鍵,即濕度、溫度、速度。


    參考文獻:

    毛成毅,杜娟,肖華亮,李增鵬.不同組織冰凍切片體會(huì ). 2017.


    (來(lái)源:微信公眾號:病理海)


    久久久精品人妻一区二区三区四_无码国产69精品久久久孕妇_亚洲av午夜精品无码专区_国产精品99久久久久久宅男