服務(wù)介紹：

        木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下可以與３,５-二硝基水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應。反應液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，而還原糖的生成量又與反應液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通過(guò)測定反應液顏色的強度，可以計算反應液中木聚糖酶的活力。

實(shí)驗流程：

1、準備樣品:

①固體樣品稱(chēng)取試樣兩份，精確至0.001 g。 加入4ml Assay buffer，充分溶解，并定容至10 ml，在4 °C條件下避光保存1~2h。1000g離心3~5min，取上清液，再用Assay buffer做適當稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之間）。

②液體樣品可以直接用Assay buffer稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在 0.04~0.10 U/ml之間）

2、配制木聚糖溶液：準確稱(chēng)取0.15g 木聚糖，使充分溶解于8ml去離子和5ml NH水溶液(3×)中，通過(guò)pH計測定，用YS溶液調節pH至5.5~5.6，補水至15ml

2、配制NH水溶液(1×)：取1份NH水溶液(3×)和2份去離子水混合即成。

3、標準曲線(xiàn)繪制：取8支離心管按下表設置，準確吸取木糖標準(10mg/ml)與Assay buffer，即得不同濃度的木糖梯度標準。

取1支離心管，加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS試劑，混勻，沸水浴加熱5min，自來(lái)水冷卻至室溫，加NH水溶液(1×)0.32ml，即為空白管。另取7支離心管，加入0.04ml 37℃預熱的Assay buffer、0.04ml木糖梯度標準和0.1mlDNS試劑，混勻，沸水浴加熱5min，自來(lái)水冷卻至室溫，加NH水溶液(1×)0.32ml，即為標準管。以空白管調零，酶標儀測定540nm處各管的吸光度。

測定樣品

①取適量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的離心管中，37°C 平衡 20 min；木聚糖溶液使用之前應充分搖勻。

②取2支離心管按下表設置依次加入相應試劑：

 以空白管調零，酶標儀測定540nm處對照管和測定管的吸光度(分別記為A₁、A₀)。

實(shí)驗結果：

全自動(dòng)生化儀檢測后導出結果，結果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！