服務(wù)介紹：

      植物過(guò)氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng )木酚微板法)檢測原理是以愈創(chuàng )木酚(又稱(chēng)2-甲氧基酚)作為底物，在酶促反應的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標儀470nm處測定吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內源性的過(guò)氧化物酶活性，尤其適用于測定水果中過(guò)氧化物酶活性。

實(shí)驗流程：

1、 準備樣品：

①植物樣品：取0.5-1.0g植物組織或水果中層果肉加入4ml預冷的POD Lysis Buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于過(guò)氧化物酶的測定。

③細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如有必要用POD Lysis Buffer進(jìn)行適當勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液，

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的過(guò)氧化物酶，可以使用POD Lysis Buffer進(jìn)行恰當的稀釋。

2、 配制POD Assay Buffer工作液：取適量的POD氧化劑和POD Assay Buffer，按POD氧化劑：POD Assay Buffer=1：14混合，

3、 POD加樣：取96孔板，按照下表設置對照孔孔、測定孔，注意：對照孔、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中是提前加熱煮沸5min的樣品

 4、 POD測定：立即以酶標儀，以對照孔為對照，測定470nm處測定孔的吸光度(A測定0)；37℃準確孵育3min后，立即加入5μl POD終止液終止反應(備選方案)，以對照孔為對照，以酶標儀測定470nm處測定孔的吸光度(A測定1)。

實(shí)驗結果：

全自動(dòng)生化儀檢測后導出結果，結果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！