服務(wù)介紹：

有氧化物質(zhì)存在下核黃素被光還原，在有氧條件下，被還原的核黃素極易再氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基(O₂^-)，O₂^-可將氮藍四唑還原為藍色的甲腙，后者在560nm處有強吸收，而SOD可清除超氧陰離子(O₂^-)，從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應后，反應液藍色愈深，說(shuō)明SOD活性愈低，反之酶活性愈高，據此通過(guò)酶標儀比色分析就可以計算出樣品中總超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用SOD抑制NBT在光照下的還原作用來(lái)確定酶活性大小，可用于檢測植物、組織、細胞、血清或其它樣品中SOD活性。

實(shí)驗結果展示：

實(shí)驗流程：

(1)  樣本接收：血清、血漿、透明液體狀樣本、組織勻漿、植物等

(2)實(shí)驗步驟：

1.準備SOD標準品：將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：200、100、50、20、10、5、2U/ml，各取20μl參考樣品進(jìn)行檢測。

2.選取合適的光源：在光照培養箱或日光燈下，用光度儀測定光度值為3500~4000Lx的適合光照反應的位置，做出標記。

3.配制NBT工作液：將Met緩沖液與NBT溶液按23:3的比例混合。

4.SOD加樣：用96孔板設置空白對照孔、光照對照孔、測定孔，在低光強條件下加入待測樣品和其它各種溶液，加入FD溶液后充分混勻。

5.SOD測定:混勻，取空白對照孔置于暗處，其他各孔置于4000Lx日光下反應20min；反應結束后，以不照光的空白對照孔調零，用酶標儀測定560nm處吸光度。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！