服務(wù)介紹：

       植物丙二醛(MDA)檢測試劑盒(TBA比色法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又稱(chēng)脂質(zhì)氧化(MDA)檢測試劑盒，是采用一種基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反應產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應，隨后通過(guò)比色法用于對植物組織(根、莖、葉、種子等)MDA進(jìn)行檢測，是專(zhuān)門(mén)用于植物脂質(zhì)氧化(lipid peroxidation)水平檢測的試劑盒，不適用于動(dòng)物組織、細胞、血液等；丙二醛在較高溫度及酸性環(huán)境中可與TBA發(fā)生反應，形成紅色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在532nm處有最大吸收，該復合物的吸光系數為155mmol/(L.cm)，并且在600nm波長(cháng)處有最小吸收，植物組織中糖類(lèi)物質(zhì)對MDA-TBA反應有干擾，我們總結出經(jīng)驗公式，以消除這一干擾，亦可以通過(guò)比標準品進(jìn)行比較，進(jìn)行含量檢測。

實(shí)驗流程：

1、 樣本處理：

①制備MDA提取液：取適量的植物根、莖、葉子、種子等，稱(chēng)量后剪碎，按每0.4g植物樣品加入4ml的比例加入組織勻漿液，充分勻漿(一般取0.4～1g植物樣品即可)。4000g離心10min，取上清液待用

②樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計算單位蛋白重量植物樣品的MDA含量；測定蛋白濃度非必須步驟，亦可采用經(jīng)驗公式計算。

2、配制TBA工作液：稱(chēng)取適量TBA，用組織勻漿液配制成濃度為0.68％的TBA工作液，例如取0.068g TBA用10ml組織勻漿液配制，最終濃度即為0.68%的TBA工作液。

3、稀釋標準品：如果進(jìn)行簡(jiǎn)易快速檢測，標準品直接稀釋至10μM；如果進(jìn)行精確檢測，取適量標準品用組織勻漿液稀釋至1、2、5、10、20、50μM；

4、樣品測定:

①分光光度計測定：在離心管或其它適當容器內加入1ml組織勻漿液作為空白對照，加入1ml MDA提取液用于測定，隨后加入1ml TBA工作液。

 ②酶標儀測定：在離心管或其它適當容器內加入200μl組織勻漿液作為空白對照，加入200μlMDA提取液用于測定，隨后加入200μl TBA工作液?？蓞⒖枷卤碓O置檢測反應體系，依次加入試劑：

③混勻, 加蓋，95℃水浴煮沸30min，加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。

④冷水浴或流水冷卻至室溫，4000g離心10min。

⑤取上清，蒸餾水調零，用分光光度計或酶標儀測定532nm處吸光度，分別記為A_空白、A_標準、A_測定；

實(shí)驗結果：

全自動(dòng)生化儀檢測后導出結果，結果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！