服務(wù)介紹：

      自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱(chēng)氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒，其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩定的含氮自由基，含一個(gè)單電子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有強吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子與此單電子配對，溶液會(huì )褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過(guò)吸光度下降的程度來(lái)反應樣品的氮自由基清除能力，主要用于檢測血清、植物組織、抗氧化類(lèi)食品、保健品及藥品等樣本。

 實(shí)驗流程：

1、準備樣品：

①植物樣品：取新鮮植物樣本，清洗干凈，研缽研碎(粉碎)，干燥箱烘干后過(guò)篩，稱(chēng)取0.05g樣品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存備用(亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝) 4℃ 5000rpm離心10min，取上清液待用；血清或尿液樣品可直接測定。

③細胞樣品：按每5×10⁶個(gè)細胞加入0.8ml氮自由基提取液，超聲破碎(功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次)，10000rpm離心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等樣品：按樣品：氮自由基提取液=1：9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存備用。

⑤    高活性樣品：如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進(jìn)行恰當的稀釋。

   2、配制維生素C溶液：將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中

   3、配制Vc標準工作液：如需測線(xiàn)性關(guān)系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標準工作液

    4、 分光光度計開(kāi)機預熱30min，調節波長(cháng)517nm(500~530nm亦可)，無(wú)水乙醇調零。

    5、DPPH加樣：按照下表設置空白管、樣本測定管、樣本對照管、陽(yáng)性對照管，溶液應按照順序依次加入，混勻，室溫避光靜置30min。

6、 OD值測定：將各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度計檢測各管吸光度值，依次記為A₀、A₁、A₂、A₃。

實(shí)驗結果：

全自動(dòng)生化儀檢測后導出結果，結果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！