服務(wù)介紹：

BCA法測蛋白的原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò )合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物，在562 nm處有最大的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據此可測定蛋白質(zhì)濃度。BCA 法與傳統方法相比，操作更簡(jiǎn)單、試劑及其形成的顏色復合物更穩定、靈敏度更高。BCA法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，對于5%以?xún)鹊娜ス竸┤鏢DS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性，但易受螯合劑、還原劑等的影響，在測定蛋白濃度前應盡量使樣本滿(mǎn)足如下要求：EDTA濃度≤10mM、DTT濃度≤1mM、2-ME≤0.01%、無(wú)EGTA。

實(shí)驗流程：

1、 配制成20mg/ml的蛋白標準溶液。

2、 取適量的20mg/ml蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為500μg/ml。

3、 配制BCA工作液。

4、 將500μg/ml蛋白標準溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加稀釋液補足至20μl，其蛋白標準濃度依次為0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。

5、 加20μl待測蛋白到96孔板或EP管中，如果樣本不足20μl，用稀釋液補足至20μl。

6、 向各孔或EP管加入200μl配制好的BCA工作液，迅速混勻，37℃孵育30～60min。

7、 冷卻至室溫，立即用酶標儀或分光光度計測定562nm波長(cháng)處吸光度，各孔或EP管吸光度減去蛋白濃度為0μg/ml的標準管的吸光度，以求得的差值為縱坐標： 以標準孔或EP管中蛋白濃度(μg/ml)為橫坐標，得出標準曲線(xiàn)及回歸方程，根據標準曲線(xiàn)計算出待測樣品的蛋白濃度。

實(shí)驗結果：全自動(dòng)生化儀檢測后導出結果，結果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱(chēng)取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來(lái)，將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！